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大肠杆菌基于自身发酵调控元件驱动正丁醇异源合成
来源:上海   发布者:左丽媛   日期:2017-01-12  

作为由梭菌属物种分泌的天然发酵产物,正丁醇具有成为燃料替代品和化学原料的潜力,因此收到广泛关注。目前,正丁醇的异源合成已在多种微生物宿主中实现。台湾国立清华大学的研究者以大肠杆菌为宿主,选择其自身发酵途径中的基因表达与转录调控元件(fermentation regulatory elements,简称FRE),驱动质粒上的正丁醇合成途径基因的转录与表达,相关结果发表在近期的《Biotechnology for Biofuels》杂志。

在这项研究中,研究者选择的自身发酵途径有:乳酸合成途径、琥珀酸合成途径、乙醇合成途径和乙酸合成途径。乳酸、琥珀酸和乙醇合成都是消耗NADH,乙酸合成消耗乙酰辅酶ANADH和乙酰辅酶A都是合成正丁醇必需前体,因此上述合成途径需被阻断。然后,研究者将上述途径中关键酶基因的5’端上游(转录与表达)调控区克隆至丁醇合成质粒以开启丁醇合成相关基因的表达;由于丁醇合成相关的基因分布在3个质粒上,因此共有64种组合。测试发现,将乙醇脱氢酶基因adhEFRE克隆至甲酸脱氢酶基因上游时,菌株的生长以及丁醇的合成都较好。此外,研究者还发现将菌株生物量显著积累之前切换到微氧条件,对酶合成的诱导以及丁醇合成都至关重要。以厌氧NADH平衡作为选择压力,工程菌株可在无诱导剂和抗生素情况下稳定合成正丁醇,在24小时内正丁醇发酵浓度可达到10g/L,在高密度发酵下的产率为0.25g/g葡萄糖。

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